苹果树腐烂病菌qPCR检测方法的建立

• 作者: 常永旗 曹克强 王亚南 王树桐 祁兴华 胡同乐 郭永斌
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 苹果腐烂病菌 实时定量PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 页码范围: 65-71
• 页数: 7页
• 分类号: S435.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2017.0127

摘要

利用ITS、β-微管蛋白和EF-1a基因序列的通用引物来扩增苹果树腐烂病菌菌株Vmm41,产物序列,与GenBank中的序列对比,设计并筛选出特异性引物对VE1-F/VE1-R.将目的片段连接到载体pUC19上制成标准品,通过优化退火温度和引物浓度,建立了实时定量PCR检测体系,并对该体系的特异性、灵敏度和可靠性进行了验证.结果表明,该体系可检测到26.4 fg/μL的模板浓度,并可从苹果轮纹病菌、链格孢菌、层出镰刀菌、木霉菌和青霉菌等苹果园常见真菌中特异性的检测出苹果树腐烂病菌.用该体系对人工接种腐烂病菌的苹果叶片进行检测验证,结果表明,利用该检测体系可检测出叶片未发病部分的腐烂病菌数量.本研究建立的定量PCR检测体系可用于苹果树腐烂病菌的快速检测,为苹果树腐烂病侵染规律及预警研究提供新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹克强	河北农业大学植物保护学院	192	2819	27.0	44.0
2	胡同乐	河北农业大学植物保护学院	80	1199	20.0	31.0
3	王树桐	河北农业大学植物保护学院	90	983	17.0	26.0
4	王亚南	河北农业大学植物保护学院	52	489	12.0	19.0
5	郭永斌	河北农业大学植物保护学院	3	22	3.0	3.0
6	祁兴华	河北农业大学植物保护学院	1	7	1.0	1.0
7	常永旗	河北农业大学植物保护学院	1	7	1.0	1.0