慢病毒介导的解偶联蛋白-2基因差异表达对人脐静脉内皮细胞增生及凋亡的影响

• 作者: 刘堃 孙涛 沈胤忱 王宁 许迅 郑志 陈凤娥 陈轶卉 顾青
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮细胞/病理生理学 细胞增殖 细胞凋亡 基因表达 慢病毒感染
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 52-56
• 页数: 5页
• 分类号: R774.1|R329.28
• 字数: 3909字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2017.01.014

摘要

目的：观察解偶联蛋白-2（UCP-2）基因差异表达对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增生及凋亡的影响。方法构建UCP-2 rs660339位点碱基是胞嘧啶（C）或胸腺嘧啶（T）的慢病毒载体UCP-2C、UCP-2T。将HUVEC分为UCP-2C组、UCP-2T组、阴性对照（NC）组，分别转染UCP-2C、UCP-2T、无意义阴性病毒。荧光显微镜观察各组HUVEC病毒感染效率；实时定量聚合酶链反应检测各组HUVEC UCP-2 mRNA表达；细胞计数试剂盒、流式细胞仪检测各组HUVEC增生、凋亡情况；蛋白免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测各组HUVEC B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）蛋白的表达及荧光强度。结果各组HUVEC病毒感染效率均＞80%。UCP-2C组、UCP-2T组HUVEC UCP-2 mRNA表达较NC组显著增高,差异有统计学意义（F=29.183， P=0.001）。目的病毒感染后48、72、96 h，UCP-2C组、UCP-2T组HUVEC增生显著高于NC组，差异有统计学意义（F=15.970、16.738、5.414，P=0.004、0.004、0.045）。感染后72 h，与NC组比较，UCP-2T组、UCP-2C组HUVEC凋亡率均降低，差异有统计学意义（F=277.138，P=0.000）；UCP-2T组HUVEC凋亡率较UCP-2C组低（P=0.003）。UCP-2T组、UCP-2C组HUVEC Bcl-2蛋白表达显著高于NC组，差异有统计学意义（F=425.679，P=0.000）；UCP-2T组HUVEC Bcl-2蛋白表达高于UCP-2C组（P=0.002）。UCP-2T组、UCP-2C组HUVEC Bcl-2蛋白荧光强度显著高于NC组，差异有统计学意义（F=11.827，P=0.008）；UCP-2T组、UCP-2C组之间HUVEC Bcl-2蛋白荧光强度差异无统计学意义（P=0.404）。结论 UCP-2 rs660339位点差异表达可能影响HUVEC增生及凋亡；UCP-2T较UCP-2C抑制凋亡作用更显著。