人IFN-γ与GM-CSF融合基因重组BCG表达与鉴定

• 作者: 尹国才 李运清 杨媛媛 薛庆节 谭文彬 陈廷
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 卡介苗 融合基因GMI-γ 基因重组
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 109-113
• 分类号: R394
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2017.02.01

摘要

目的 构建人IFN-γ与GM-CSF融合基因的卡介苗(BCG)重组质粒,并在卡介苗中分泌表达人IFN-γ与GM-CSF蛋白.方法 采用反转录PCR,分别获得人IFN-γ与GM-CSF基因编码序列的cDNA.将IFN-γ与GM-CSF基因进行PCR扩增,通过接头(Gly4 Ser)3将其连接,形成融合基因,将融合基因插入到pMV261质粒HSP60启动子下游,构建一个分泌型的卡介苗-大肠杆菌穿梭表达质粒pMVGMI-γ.转化感受态细胞E.coli DH5α,在LB培养基平板上进行卡那霉素抗性选择,选择阳性克隆提取质粒后转化感受态BCG,用(NH4)2SO4沉淀、分子筛层析柱Bio-Gel P-6 DG纯化目的蛋白,10% SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化结果,Western-blot检测人IFN-γ与GM-CSF基因在rBCG中的表达.结果 目的基因GM-CSF和IFN-γRT-PCR产物大小分别为461 bp和432 bp,与预期值一致.构建的重组质粒经双酶切、扩增及测序鉴定,融合基因GMI-γ(462+435-45=852 bp)正]确插入载体,成功转化入BCG感受态细胞,且正确表达.结论 融合基因GMI-γ修饰的rBCG构建成功并表达,为进一步探讨rBCG免疫活性及发展新型抗结核杆菌疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈廷	济宁医学院基础学院	92	356	9.0	14.0
2	薛庆节	济宁医学院基础学院	42	74	5.0	7.0
3	谭文彬	济宁医学院基础学院	42	79	5.0	6.0
4	尹国才	青岛大学医学院	17	84	5.0	8.0
6	杨媛媛	济宁医学院基础学院	13	18	2.0	3.0
7	李运清	济宁医学院基础学院	11	23	3.0	4.0