PTPN6重组蛋白的真核表达纯化及功能鉴定

• 作者: 熊玉锋 郝文波 钱雯 陈洁盈
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: PTPN6 A549 真核表达 增殖
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 428-433
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.05.0068

摘要

[目的]构建真核表达载体pENTER-PTPN6,在HEK293T细胞中表达并纯化,并初步探讨PTPN6对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响.[方法]构建真核表达载体pENTER-PTPN6,利用jetPRIME分别转染HEK293T和A549细胞,用Western Blot检测PTPN6在细胞中的表达情况,并通过磁珠纯化PTPN6蛋白,最后利用CCK-8法检测PTPN6对A549的增殖影响并绘制细胞生长曲线.[结果]Western Blot结果显示转染细胞内有PTPN6的高表达,磁珠纯化得到高纯度的目标蛋白,而且转染后的肺癌细胞A549增殖能力较对照组显著下降.[结论]成功构建了真核表达质粒pENTER-PTPN6并在真核表达系统中表达和纯化,重组PTPN6具有抑制A549细胞的增殖的作用,为进一步探讨PT-PN6基因的功能及寻找治疗肺癌新方向奠定了基础.