靶向ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体的构建

• 作者: 张青峰 李文娜 莫镇涛 郭晓龙 野庆松 高书颖
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 靶向敲除 ezrin增强子 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 19-22
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2017.06.019

摘要

构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能.设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游.合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒pX459构建重组质粒pX459-sgRNA-EL和pX459-sgRNA-ER.将鉴定正确的CRISPR/Cas9重组质粒共转染至食管癌EC109细胞中,提取细胞基因组DNA,针对gRNA靶位点两侧进行PCR扩增和亚克隆测序分析.经限制性内切酶酶切和测序鉴定表明,CRISPR/Cas9重组质粒构建正确.在共转染重组质粒的细胞基因组DNA中检测到ezrin增强子关键区的缺失.成功构建了靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体,能够实现目标序列的定向敲除.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张青峰	遵义医学院珠海校区生物工程系	12	31	4.0	5.0
2	李文娜	遵义医学院珠海校区生物工程系	19	138	6.0	11.0
3	野庆松	遵义医学院珠海校区生物工程系	2	6	2.0	2.0
4	高书颖	遵义医学院珠海校区生物工程系	4	3	1.0	1.0
5	莫镇涛	遵义医学院珠海校区生物工程系	14	73	5.0	8.0
6	郭晓龙	遵义医学院珠海校区生物工程系	1	3	1.0	1.0