钩端螺旋体M23超家族金属内肽酶生物学活性及致病相关性的研究

• 作者: 严杰 张颖颖 方佳琪 林旭瑷 胡玮琳 葛玉梅
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 问号钩端螺旋体 M23超家族 金属内肽酶 生物学活性 致病性
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 753-760
• 页数: 8页
• 字数: 5761字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2017.10.006

摘要

目的 了解并确定问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株LA2582 和LA2901 基因产物金属内肽酶活性及其致病相关性.方法 采用生物信息学软件分析LA2582 和LA2901 基因结构与功能.构建LA2582 和LA2901 基因胞外区原核表达系统,Ni-NTA 亲和层析法提纯目的重组表达产物rLA2582 和rLA2901.采用分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解偶氮酪蛋白底物的活性.采用荧光分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解Dabsyl-Leu-Gly-Gly-Gly-Ala-Edans 荧光标记五肽底物的活性并测定其Km 和Kcat 值.采用SDS-PAGE 和分光光度法分别检测rLA2582 和rLA2901 水解细胞外基质(ECM)分子Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、纤维连接蛋白(FN)和刚果红标记弹性蛋白(ELN)的活性.采用实时荧光定量RT-PCR 和Western blot 法分别检测问号钩端螺旋体赖株感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后LA2582 和LA2901 基因mRNA 和蛋白质表达水平.结果 LA2582 和LA2901 基因产物均为含信号肽和HXH 基质金属蛋白酶基序的锌离子依赖M23 家族Gly-Gly 金属内肽酶.rLA2582 和rLA2901 不能水解偶氮酪蛋白,但能水解荧光五肽底物,其Km 和Kcat 值分别为126. 54μmol/ L 和4. 67/ s 、190. 25 μmol/ L 和4. 86/ s .rLA2582 和rLA2901 具有水解COL1、FN 和ELN 的活性.问号钩体赖株感染HUVEC 后,LA2582 和LA2901 基因mRNA、蛋白质表达水平均显著升高(P<0. 05).结论 问号钩体赖株LA2582 和LA2901 基因产物是具有水解ECM 分子活性的锌离子依赖M23 金属内肽酶,与问号钩体侵袭力密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	林旭瑷	浙江大学医学院病原生物学系	28	47	4.0	5.0
3	张颖颖	浙江大学医学院病原生物学系	7	32	2.0	5.0
4	胡玮琳	浙江大学医学院病原生物学系	13	17	3.0	4.0
5	葛玉梅	浙江省人民医院临床医学检验中心	7	35	3.0	5.0
6	方佳琪	浙江大学医学院病原生物学系	4	25	3.0	4.0