人p52Shc1蛋白的真核表达及其活性鉴定

• 作者: 杨恒 熊玉锋 邓昊 郝文波
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: p52Shc1 293T 重组质粒构建 真核表达 cck-8法
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 434-439
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.05.0069

摘要

[目的]构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体,并根据其生物学活性进行鉴定.[方法]采用PCR技术以Shc1 cDNA基因为模板扩增Shc1基因,将其插入pEnter载体构建pEnter-p52shc1重组质粒,将重组质粒与空载体分别转入293T细胞,利用Western Blot检测p52Shc1表达情况,并使用cck-8法绘制细胞生长曲线.[结果]通过双酶切获得2条与目的基因大小相符的片段,测序结果显示符合率为100％,Western Blot结果显示在52 kDa大小处出现清晰单一条带,cck-8法绘制的细胞生长曲线显示,转染重组质粒pEnter-p52Shc1的细胞生长速率明显大于转染pEnter空载的细胞(P＜0.01).[结论]成功构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体并在293T细胞中成功表达,转染重组质粒并表达p52Shc1蛋白的293T细胞的增值速率明显提高.