大骨鸡HSP70蛋白的表达、纯化及质量检测

• 作者: 朱弘焱 杨卉新 田玉民 苏玉虹 赵颂 陶晓莉
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 大骨鸡 HSP70 克隆表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: S831
• 字数: 3190字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达质粒pColdⅡ-HSP70,诱导表达、纯化后检测HSP70蛋白的质量.将目的基因扩增后克隆至表达载体pCold Ⅱ,构建重组载体pColdⅡ-HSP70,在2种大肠杆菌菌株(BL21 (DE3)和Rosetta(DE3) pLysS中经IPTG在不同温度与不同浓度条件下诱导表达并纯化.经SEC-FPLC和HPLC进行纯度鉴定,采用鲎试剂检测蛋白内毒素含量(将HSP70蛋白按1 200、600、120倍稀释);Western blot及质谱方法检测蛋白分子量.结果显示:酶切和测序结果均证实HSP70表达载体构建正确,可诱导表达.经IPTG诱导表达后确定BL21 (DE3)在37℃条件下表达蛋白效果最佳,经检测HSP70蛋白的相对分子质量为71 988.04,蛋白纯度大于90％,内毒素小于500 Eu/mg.结果表明:成功构建了大骨鸡HSP70基因的表达载体,获得了纯化的HSP70蛋白,为进一步研究HSP70在热应激中的作用机制提供了基础.