重组人促红素理化对照品的质量评价

• 作者: 周勇 李响 秦玺 范文红 陶磊 韩春梅 饶春明
• 来源期刊: 药物分析杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组人促红素 理化对照品 一级结构确证 异构体分析 质量标准 质量评价
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 标准研讨
• 页码范围: 1117-1126
• 页数: 10页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.16155/j.0254-1793.2017.06.26

摘要

目的:建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准,对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价.方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用LC-MS绘制质量肽图谱.色谱条件:采用BEH300 C4色谱柱(2.1 mm×50mm,3.5 μm),流动相为水(A)-乙腈(B)-1％甲酸水溶液(C),梯度洗脱(0～60 min,1％B→60％B,10％C;60～61 min,60％B→90％B,10％C;61～75 min,90％B→÷1％B,10％C),流速0.2 mL· min-1,柱温为40℃,样品保存温度为10℃,上样量5 μL;质谱条件:MSE模式采集数据,毛细管电压3 000 V,Cone电压40 V,去溶剂气体温度350℃,源温120℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围m/z 50～2 000.确证一级结构,二硫键链接方式及糖基化位点;绘制N糖图谱,分析寡糖结构;用毛细管区带电泳分析异构体.采用压力进样3.45 kPa;进样时间10 s,分离电压15.4 kV,分离时间80 ain,检测波长214 nm.其余检测项目按中国药典2015年版三部方法进行.结果:建立的方法适合促红素理化对照品的检测,各样品的氨基酸序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,Ⅳ-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致.等电聚焦结果为5～8条电荷异构体条带,不同样品的电荷异构体的组成比例有所差异,蛋白质含量、体内比活性、电泳纯度、液相纯度、等电聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽图结果均符合拟定的理化对照品质量标准.结论:建立了理化对照品的质量标准,不同企业的理化对照品质量总体稳定一致,但糖基化水平存在一定差异,分析比较了不同企业的促红素理化对照品在生物比活性,糖基化,异构体分布、电荷异质性等方面的差异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	饶春明		98	70	4.0	5.0
2	陶磊		49	33	3.0	4.0
3	李响		33	20	3.0	3.0
4	周勇		13	8	1.0	2.0
5	秦玺		18	10	2.0	2.0
6	范文红		16	6	2.0	2.0
7	韩春梅		41	23	3.0	4.0