家蚕微孢子虫海藻糖合成酶基因Nbtps1的克隆与原核表达

• 作者: 唐旭东 徐莉 朱峰 李孝良 沈中元 白兴荣
• 来源期刊: 蚕业科学
• 关键词: 家蚕微孢子虫 海藻糖合成酶 基因克隆 序列分析 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 796-802
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2017.05.002

摘要

海藻糖在保护细胞质膜和生物大分子空间结构,维持胞内渗透压增大的过程中发挥重要作用,海藻糖合成酶是海藻糖合成途径中的一个关键酶.通过检索微孢子虫基因组数据库发现,家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)基因组中含有4个海藻糖合成酶基因,其中Nbtps1基因的开放阅读框长1 386 bp,为单外显子结构,编码461个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量53.7 kD,等电点5.19.NbTPS1蛋白序列含有1个糖基转移酶结构域和4个潜在的N-糖基化位点,亚细胞定位预测该蛋白质位于细胞质中.多重序列比对分析结果表明,NbTPS1与东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozo-on cuniculi)海藻糖合成酶的氨基酸序列相似度分别为59.0％、54.7％,系统发育进化树显示三者的亲缘关系与之相符.构建重组表达载体Nbtps 1/pET-28a(+)并转化大肠埃希菌Rosetta(DE3)菌株,经IPTG诱导表达及亲和纯化后获得最终质量浓度为1.18 mg/mL的重组融合蛋白His-NbTPS1.用纯化后的融合蛋白制备兔多克隆抗体Anti-NbTPS1,利用间接ELISA法测定多克隆抗体的效价达1∶25 600,并通过Western blotting检测验证了该多克隆抗体的特异性,为研究NbTPS1的生物学功能以及家蚕微孢子虫的间接免疫检测奠定了实验基础.