人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性

• 作者: 张全爱 曹鹏程 渠志灿 赵亚蕊 赵峰梅 赵邑 郑耀武
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 自分泌运动因子 哺乳细胞 表达 纯化 酶学特性
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 484-490
• 页数: 7页
• 分类号: Q786|Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.05.0077

摘要

[目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析.[方法]以pFastBacTMHTA-ATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8 His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293F细胞,SDS-PAGE检测ATX的表达.通过Ni柱和凝胶层析两步法纯化ATX,HPLC鉴定ATX蛋白的纯度.利用Bis-pNPP底物检测纯化ATX的活性及酶学性质.[结果]真核表达质粒pInsulator-ATX-8 His构建成功,并在HEK293F细胞中成功表达,经纯化后ATX蛋白纯度达到98％,并且纯化的ATX具有磷酸二酯酶的活性.酶学性质分析,该酶反应最适pH值为9.0,在0～50℃有较好的热稳定性,金属螯合剂EDTA可抑制ATX活性,金属离子Ca2+、Mg2+、Zn2+促进ATX的活性.[结论]实现了人ATX在哺乳细胞中的表达,获得了高纯度的ATT蛋白,完成了ATX酶学性质的分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亚蕊		1	0	0.0	0.0
2	曹鹏程		1	0	0.0	0.0
3	郑耀武		3	3	1.0	1.0
4	张全爱		1	0	0.0	0.0
5	赵峰梅		1	0	0.0	0.0
6	渠志灿		1	0	0.0	0.0
7	赵邑		1	0	0.0	0.0