家蚕Sox家族基因BmDichaete的克隆与表达分析

• 作者: 刘太行 吴云飞 张倩 彭丽娜 杜国玉 杨基贵 潘敏慧 王炜
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕 BmDichaete 序列分析 原核表达 表达谱 胚胎发育
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 513-522
• 页数: 10页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2017.05.003

摘要

[目的]Sox家族是一类转录调控因子,在多细胞动物的发育过程中起到了极其重要的作用.本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Sox家族基因,并分析其在幼虫不同组织和发育阶段的表达模式及功能.[方法]采用cDNA末端快速扩增方法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆家蚕Sox家族基因,并对其序列进行生物信息学分析.构建原核表达载体,诱导原核表达并得到其蛋白的多克隆抗体,并以Western blot验证其蛋白在家蚕胚胎发育时期(产卵后24,48,72,96,120,144,168,192和216 h)和蚁蚕的表达特征.同时,使用半定量RT-PCR技术分析这一基因在家蚕整个发育过程以及5龄第3天幼虫不同组织(精巢、卵巢、神经节、头部、丝腺、脂肪体、马氏管、中肠、后肠、表皮、血液、气管)中的表达谱.[结果]克隆获得一个家蚕Sox家族基因,将其命名为BmDichaete(GenBank登录号:KY914554),其cDNA序列全长为1 541 bp,开放阅读框长741 bp,编码246个氨基酸,预测分子量大小为27.3 kD,等电点为9.89.同源序列比对和系统进化分析显示,BmDichaete具有Sox家族的典型HMG结构域,并与其他鳞翅目昆虫的Dichaete蛋白具有较高的同源性.对其表达模式分析发现,BmDichaete在家蚕整个发育时期都有表达,从胚胎发育后期到蛹前期持续高表达,在蛹后期及成虫期表达量有所下降,并且该基因在家蚕5龄第3天幼虫的卵巢、头部、丝腺及后肠组织中显著高表达.Western blot分析结果显示,BmDichaete在家蚕胚胎发育过程中持续而稳定地表达.[结论]家蚕BmDichaete具有典型HMG结构域,属于Sox家族成员.BmDichaete在家蚕胚胎发育的各个时期都发挥作用.本研究为进一步探索该基因在家蚕中的功能奠定了基础.