基于毛细管电泳的日本落叶松MSAP反应体系的建立

• 作者: 刁姝 孙晓梅 孙超 张守攻
• 来源期刊: 林业科学研究
• 关键词: DNA甲基化 甲基化敏感扩增多态性(MSAP) 毛细管电泳 体系建立 日本落叶松
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 361-367
• 页数: 7页
• 分类号: S791.223
• 语种: 中文
• DOI: 10.13275/j.cnki.lykxyj.2017.03.001

摘要

[目的]建立基于毛细管电泳的日本落叶松最佳MSAP反应体系,获得条带清晰,信号强度均一的DNA甲基化图谱,为今后开展日本落叶松表观遗传变异研究奠定基础.[方法]以日本落叶松未成熟木质部为试材,设置不同梯度的DNA模板用量以及选择扩增体系中引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和exTaq DNA聚合酶浓度,确定各组分不同用量对毛细管电泳效果的影响,从而确立最适的MSAP反应体系.[结果]结果表明模板DNA以及exTaq DNA聚合酶浓度对毛细管电泳结果影响不明显,而高的引物浓度会引起条带的减少.Mg2+及dNTP浓度是影响毛细管电泳结果最为关键的因素,浓度过低或过高会导致毛细管电泳图谱条带明显减少,杂峰显著增多.[结论] 最终确立的反应体系为:DNA 模板100 ng,引物0.75 pmol·μL-1,Mg2+ 2 mmol·L-1,dNTP 0.375 mmol·L-1和exTaq DNA聚合酶 0.05 U·μL-1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张守攻	中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室	176	2792	28.0	41.0
2	孙晓梅	中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室	79	1108	20.0	29.0
3	刁姝	中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室	2	2	1.0	1.0
4	孙超	中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室	1	2	1.0	1.0