五种出血热病毒重组酶聚合酶等温扩增方法的建立

• 作者: 吴晓燕 康晓平 张森 户义 曹雪锋 李裕昌 李靖 杨银辉
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组酶聚合酶检测 等温扩增 出血热病毒
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 526-531
• 页数: 6页
• 分类号: R373.3
• 字数: 3351字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2017.06.09

摘要

目的 建立五种出血热相关病毒,即扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒和黄热病毒的一步法重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术,为病原体的确定提供现场快速检测方法.方法 通过基因组序列分析,选择每种病毒的特异核酸片段作为检测靶基因,针对靶基因序列设计RPA检测的引物和探针;取系列稀释的模板基因进行RPA检测,确定其灵敏性;取出血热相关病毒核酸为模板进行RPA检测,确定其特异性;验证不同温度反应条件(37~42℃)对检测结果的影响.结果 五种出血热病毒的RPA反应体系均可有效扩增靶基因,灵敏性为1.5×102~1.5×103copies/反应,与其他出血热相关病毒的核酸无交叉反应;RPA实验在37~42℃均可实现靶基因的有效扩增.结论 建立了五种出血热病毒的RPA等温扩增体系,该体系反应快速,温度范围宽,适用于现场快速检测.