猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘蓓蓓 华利忠 张珍珍 武昱孜 熊祺琰 王佳 邵国青 韦艳娜
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 猪鼻支原体 双重荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1491-1498
• 页数: 8页
• 分类号: S858.28
• 字数: 4728字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.08.013

摘要

建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法.根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性.建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10 copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5％,重复性好.检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80％,鼻拭子阳性率22％,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33％;猪鼻支原体的肺阳性率为40％,鼻拭子阳性率66％,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67％.建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测.该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术.