鸡PERK的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘梦茜 吴异健 周五朵 李春燕 王全溪 袁晓琴 许丽惠 陈仕怡
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 鸡蛋白激酶R样内质网激酶(PERK) 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 428-433
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2017.04.012

摘要

根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1500 bp的一段基因(15~1515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱导表达条件,纯化重组蛋白后免疫兔并制备多克隆抗体.PCR鉴定、酶切鉴定和测序结果表明,pET-32a(+)-PERK重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳鉴定结果表明,重组蛋白在1.0 mmol·L-1 IPTG、25℃下诱导9 h时的表达量最大.蛋白纯化结果表明,100 mmol·L-1咪唑洗脱液可较好地洗脱重组蛋白,获得较多的纯化蛋白.免疫结束后,抗体效价检测结果表明,制备的多克隆抗体效价达1:32000,可以与重组蛋白特异结合.