华游蛇PLIγ的毕赤酵母表达及其抗蛇毒sPLA2活性

• 作者: 孙士民 张登虹 李兴章 李婧婧 黄春洪
• 来源期刊: 南昌大学学报(理科版)
• 学科: 生物学
• 关键词: PLIγ 蛇毒PLA2 酵母表达 出血毒性 免疫共沉淀
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 页码范围: 158-165
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 5612字
• 语种: 中文

摘要

抗蛇毒血清作为抗蛇伤中毒特效药,其生产和临床应用上的局限导致很多伤者得不到及时救治.PLI(phospholipase A2 inhibitors)是蛇自身表达的解毒蛋白,它可以抑制蛇毒主要毒素PLA2进行自我保护.我们实验室前期在华游蛇中分离到一个PLIγ,它对蛇毒PLA2酶活性和出血毒均有强抑制效果.本研究通过酵母对华游蛇PLIγ进行表达.将PLIγ连接到pPICZαA表达载体,重组质粒通过电转化方式导入毕赤酵母GS115.在30 ℃、250 r·min-1条件下,使用终浓度0.5%甲醇对筛选的转化子进行诱导,连续培养120 h,每隔24 h收集发酵液上清,用Western Bolt检测PLIγ表达水平,确定72 h为最佳诱导时间.采用镍柱亲和层析分离纯化PLIγ,SDS-PAGE检测纯度.活性实验表明:重组PLIγ对五步蛇蛇毒PLA2酶活的抑制效率为84%,并可以有效抑制其出血毒性.体外免疫共沉淀表明重组PLIγ与蛇毒sPLA2 IB和IIA型均存在直接相互作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄春洪	南昌大学基础医学院	13	39	4.0	6.0
2	李婧婧	南昌大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
3	李兴章	南昌大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
4	孙士民	南昌大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
5	张登虹	南昌大学基础医学院	1	0	0.0	0.0