淀粉磷酸化酶原核表达及单克隆抗体的制备

• 作者: 余厚美 安飞飞 欧文军 罗秀芹 陈松笔
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 木薯 淀粉磷酸化酶 蛋白表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（14）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 28-32
• 页数: 5页
• 分类号: S-3
• 语种: 中文

摘要

旨在体外表达淀粉磷酸化酶,免疫小鼠制备单克隆抗体.用PCR扩增木薯淀粉磷酸化酶基因,将其克隆到原核表达载体(pET28a)中,经E.coli表达纯化淀粉磷酸化酶.用纯化的淀粉磷酸化酶蛋白免疫Babl/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价,取小鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞融合,制备能产生抗淀粉磷酸化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并检测其亚型和抗体稳定性.重组质粒在E.coli中能高效表达淀粉磷酸化酶,免疫小鼠后取效价高的3#小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合,共获得15株抗体效价均达到105以上,能稳定分泌抗淀粉磷酸化酶抗体的细胞株,与钙调蛋白、牛血清白蛋白无交叉反应,抗体亚型鉴定其中13株为IgG型抗体,其中2株抗体性能非常稳定.本实验制备的淀粉磷酸化酶单克隆抗体效价高、特异性强、稳定性好,为后续木薯中淀粉磷酸化酶研究奠定基础.