全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性

• 作者: 侯利平 刘丹 刘悦玫 孟晓光 李斌 欧阳伟民 甄里 魏开华
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 化学
• 关键词: 全柱成像毛细管等电聚焦电泳 电荷异质性 重组蛋白质药物 抗体 药学研究
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 343-348
• 页数: 6页
• 分类号: O657.8|O629.73
• 字数: 4588字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2017.03.008

摘要

评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果.测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差＜0.50％).人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(pI 5.95 ±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH2.5～5.0与pH 3.0～10.0按1∶1混合,聚焦电压1000V(l min)～1 800 V(4 min)～2 200 V(1 min).cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测.