Klotho与自噬在脓毒症急性肾损伤小鼠中的表达趋势

• 作者: 仝欢 卢中秋 吕望 洪广亮 褚晓琼 赵光举 陈宇 陈朝生 陈薪薪
• 来源期刊: 中华急诊医学杂志
• 关键词: 脓毒症 急性肾损伤 Klotho 自噬 盲肠结扎穿刺 LC3-Ⅱ P62 小鼠
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 重症感染
• 页码范围: 370-376
• 页数: 7页
• 字数: 5561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2017.04.003

摘要

目的 研究脓毒症急性肾损伤小鼠中Klotho与自噬的关系.方法 选用清洁级健康雄性Balb/c小鼠,用盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture,CLP)建立小鼠脓毒症急性肾损伤模型,分别在CLP造模后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d处死小鼠(n=12只);假手术组(Sham) (n=6)1 d处死,正常组(Normal)(n=6)同时处死.留取血清检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织行HE和PAS染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Western blot和免疫组化检测肾组织Klotho蛋白、LC3蛋白和P62蛋白的表达以及分布.SPSS 23.0软件采用独立样本资料的t检验进行统计学分析.结果 CLP术后Scr和BUN明显升高,1d肘达高峰,分别为(165.64 ±20.56) μmol/L和(45.51 ±4.05) mmol/L;HE和PAS染色显示肾小管刷状缘上皮细胞脱落,基底膜暴露,间质炎症细胞浸润,电镜显示肾脏可见自噬小体和吞噬泡.与Sham组相比,Klotho蛋白浓度从3h开始逐渐变淡,至1d时达最低值(t=51.851,P＜0.01),2d时有所恢复,然后逐渐转浓;LC3-Ⅱ呈相反的变化趋势,从3h开始逐渐增浓,至1d时达峰值(t=-22.676,P＜0.01),2d时有所下降,然后逐渐变淡,而P62(=6.43,P=0.002)作为自噬的相关蛋白与LC3-Ⅱ反应相反,表明自噬的激活作用,在1d这个时间点最显著.免疫组化显示Klotho蛋白和LC3-Ⅱ蛋白主要分布于肾小管胞浆内.CLP术后1d,Klohto蛋白明显减弱(t=-8.371,P＜0.01),LC3-Ⅱ蛋白明显增浓(t=4.995,P=0.001).结论 脓毒症急性肾损伤是Klotho减少,自噬增强的一个过程,Klotho和自噬的表达具有一定的时间依赖性.