Cep70的细胞定位分析及在微管聚合中的作用研究

• 作者: 史兴娟 张俞
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: Cep70 抗体 免疫荧光 微管聚合
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1094-1099
• 页数: 6页
• 分类号: S852
• 字数: 4237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201707012

摘要

[目的]本试验旨在研究Cep70的细胞定位及其在微管聚合中的调节作用.[方法]利用原核表达质粒pMALp2T-Cep70,在细菌中诱导表达融合蛋白MBP-Cep70.用融合蛋白免疫小鼠,获得特异性的抗Cep70抗体.首先用该抗体对细胞进行免疫荧光显微分析,检测Cep70在细胞内的定位,再利用荧光标记的微管体外组装试剂盒研究Cep70在体外微管聚合中对微管形态的调节,最后利用微管混浊度试验,验证Cep70对微管聚合的功能影响.[结果]通过从细菌中诱导纯化蛋白,获得了大量高纯度的融合蛋白MBP-Cep70.纯化蛋白免疫小鼠后得到了靶向Cep70的抗体.免疫荧光显微分析发现Cep70定位在微管组织中心(MTOC),即中心体上.通过对荧光标记的微管蛋白进行体外组装分析,发现Cep70增加了体外聚合微管的长度.进一步通过微管浑浊度试验,发现Cep7O促进了体外微管的聚合.[结论]Cep70在细胞内定位在微管组织中心上,且在体外微管聚合上具有一定促进作用.