家蝇GNBP3丹基因克隆及感染白色念珠菌后的表达

• 作者: 修江帆 吴建伟 尚小丽 张迎春 王宇 王涛 罗嫚 胡亚
• 来源期刊: 环境昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: GNBP3 实时荧光定量PCR 感染 mRNA水平 家蝇
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 596-604
• 页数: 9页
• 分类号: Q963
• 字数: 6323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0858.2017.03.14

摘要

对家蝇GNP3基因进行克隆及生物信息学分析,并对该基因在感染白色念珠菌Candida albicans后的表达情况进行研究.从构建的家蝇Musca domestica幼虫cDNA质粒文库中筛选到GNBP3基因,克隆并运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析.白色念珠菌注射感染家蝇幼虫并收集标本,逆转录,通过荧光定量PCR检测感染样本中GNBP3基因的表达情况,结果进行统计学分析.研究结果表明,GNBP3基因ORF全长1473 bp,编码490个氨基酸,理论分子量为55.8 kDa,等电点为6.85;感染后不同时间点,感染组与对照组比较,在3h、12 h、36 h、48 h GNBP3 mRNA的表达明显增高,两组比较有显著性差异(P＜0.05),而24 h表达差异性最小;感染后不同组织中感染组与对照组比较,3h和12 h时,在体壁、血淋巴、脂肪体中的表达量升高,具有显著性差异(P＜0.05);24h时,在血淋巴中的表达量较对照组高,而在唾液腺和脂肪体中的表达量呈下降趋势,均具有显著性差异(P＜0.05);48 h,在血淋巴和脂肪体中表达量较对照组高,在中肠的表达量较对照组低,均具有显著性差异(P＜0.01).成功克隆GNBP3基因且在家蝇感染白色念珠菌后GNBP3的表达水平随时间的推移呈现先升高后降低再升高的趋势,在各组织中以在免疫组织(血淋巴、脂肪体)中的表达显著增高,推测其在真菌识别过程中发挥潜在作用.