microRNA-140真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张洋洋 张绪美 彭效祥 赵荣兰
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: microRNA-140 软骨细胞 真核表达载体 定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 35-38,30
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 3933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2017.08.010

摘要

目的 构建miR-140真核表达载体并检测其在兔软骨细胞中的表达情况.方法 以人全血标本基因组为模板,PCR扩增出带有酶切位点的miR-140序列,将该序列定向克隆入pBudCE4.1载体中,构建pBudCE4.1-miR-140真核表达载体.将核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide,NNS)修饰的壳聚糖(NNSCS)分别与pBudCE4.1-miR-140重组质粒及pBudCE4.1空质粒形成纳米复合物,分别瞬时转染体外分离培养的正常兔原代关节软骨细胞,实时荧光定量PCR方法检测miR-140的表达情况.结果 构建的pBudCE4.1-miR-140真核表达质粒酶切鉴定和测序结果均正确,表明miR-140成功克隆入pBudCE4.1载体中.实时荧光定量PCR结果表明,与NNSCS/pBudCE4.1对照组相比,NNSCS/pBudCE4.1-miR-140转染组软骨细胞中miR-140表达升高约14.5倍(P＜0.05).结论 成功构建了pBudCE4.1-miR-140真核表达载体,瞬时转染后软骨细胞可以有效地高表达miR-140,为将来探究miR-140在软骨损伤修复中的作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张绪美	潍坊医学院附属医院病理科	10	24	3.0	4.0