基于Avicel-结晶紫染色空斑的中东呼吸综合征冠状病毒感染滴定与中和抗体检测方法

• 作者: 朱娜 王慧娟 王文玲 谭文杰 赵莉 邓瑶 陆柔剑 黄保英
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 中东呼吸综合征冠状病毒 生物安全三级实验室 空斑试验 Vero细胞 微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物 中和试验
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 62-67
• 页数: 6页
• 字数: 4491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2017.01.010

摘要

目的 针对中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV),建立安全、操作简易的空斑试验检测方法.方法 将MERS-CoV(EMC/2012)感染Vero或Huh7.5细胞,通过研究MERS-CoV感染后镜下细胞病变与染色后蚀斑,比较染毒时间(2 d和3 d)以及细胞培养覆盖物[琼脂、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物(Avicel)]对空斑试验的影响,确定MERS-CoV空斑试验适用的细胞类型、染毒时间以及细胞培养覆盖物,并将该方法用于MERS-CoV中和抗体的检测.结果 MERS-CoV感染Vero细胞后能形成清晰的病毒空斑;染毒后3 d后能稳定清晰地形成MERS-CoV特异性空斑;微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物覆盖细胞所产生的病毒空斑较琼脂覆盖物更为清晰,操作简易,更易于在BSL-3实验室进行操作;该方法可用于MERS-CoV中和抗体的检测.结论建立了基于Avicel-结晶紫染色技术的适用于BSL-3实验室操作的MERS-CoV空斑试验方法,为MERS-CoV的滴定、中和抗体检测等提供了实验资料.