荧光转基因斑马鱼Tg(ere-vtg:egfp)质粒的构建及验证

• 作者: 丁训城 夏敏杰 孙冰 李卫华 胡晶莹 许慧慧
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 环境雌激素 转基因斑马鱼 卵黄蛋白原 绿色荧光蛋白 环境监测
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著丨方法研究
• 页码范围: 511-516
• 页数: 6页
• 分类号: R114
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2017.17210

摘要

[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17a-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法.[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1～2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼系.将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定,并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定.[结果]经显微注射Tg(ere-vtg:egfp)质粒并进行基因筛选,成功构建Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼.EE2诱导Tg(ere-v喀egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)与浓度、时间有关.当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时,可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP.当暴露于不同结构的雌激素类化合物时,Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达,而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达.[结论]采用Tg(ere-vegp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况.