线粒体DNA数目不同的人角质形成细胞模型的建立

• 作者: 严锐 倪一平 刘纪廷 孙一丹 安艳 张洁 张莉 王小娟 陶莎莎 马陈西南
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 线粒体DNA 线粒体DNA缺失HaCaT细胞系 溴化乙锭
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1188-1195
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2017.09.0062

摘要

该研究采用溴化乙锭(ethidium bromide,EtBr)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)进行诱导,采用RT-PCR法、MTT法和健那绿染色技术联合鉴定EtBr对HaCaT细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数的影响,建立不同mtDNA拷贝数目的HaCaT细胞模型.结果显示,HaCaT细胞经100 ng/mL和50 ng/mL EtBr分别处理10 d后,细胞形态随着处理时间的延长发生改变,由规则铺路石形状逐渐变圆,某些细胞体积变小,成团生长,细胞膜边缘不光滑,且随着mtDNA数目的减少,细胞增殖速率明显下降.RT-PCR分析结果显示,与对照组相比,50 ng/mL和100 ng/mL EtBr处理10 d的HaCaT细胞中,mtDNA的拷贝数分别减少了52.9％和97.6％[以线粒体DNA脱氢酶1(mitochondrial NADH dehydrogenase 1 gene,ND1)与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的比值来表示mtDNA的相对拷贝数变化情况].健那绿染色显示,对照组HaCaT细胞中可见分散存在的蓝绿色线粒体颗粒,1 00 ng/mL EtBr处理10d后的HaCaT细胞中,显微镜下蓝绿色线粒体颗粒明显减少.综上所述,该研究证明了HaCaT细胞可通过EtBr诱导被成功培养成ρ-细胞,且EtBr浓度与HaCaT细胞mtDNA拷贝数的变化在一定的范围内存在着剂量-效应关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王小娟		9	44	4.0	6.0
2	张洁		42	152	7.0	11.0
3	张莉		92	532	11.0	19.0
4	严锐		5	0	0.0	0.0
5	安艳		30	113	6.0	8.0
6	陶莎莎		3	1	1.0	1.0
7	孙一丹		4	0	0.0	0.0
8	刘纪廷		5	13	2.0	3.0
9	倪一平		2	4	1.0	2.0
10	马陈西南		1	0	0.0	0.0