靶向人Beclin1非编码区小分子干扰方法的建立及效果评价

• 作者: 刘少军 黄桢钧
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: Beclin1 5′-UTR 3′-UTR siRNA 自噬
• 年，卷（期）: 2017,（24）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3776-3779
• 页数: 4页
• 字数: 2818字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立靶向人Beclin1非编码区小分子干扰(siRNA)的方法并对其效果进行评价.方法 设计分别靶向人Beclin1 mRNA不同区域的siRNA:靶向5′-UTR的siRNA-#1、靶向3′-UTR的siRNA-3#和siRNA-4#,及靶向编码区的阳性对照siRNA-2#.各siRNA转染HEK293细胞48 h后,蛋白印迹法检测Beclin1及自噬标记蛋白LC3的变化;或者采用双荧光mRFP-GFP-LC3(tfLC3)质粒再转染24 h,荧光显微镜观察并统计细胞内红色及黄色LC3亮点的变化.结果 转染siRNA后,特异靶向3′-UTR的siRNA-3#和siRNA-4#及靶向编码区的siRNA-2#(阳性对照)能显著抑制HEK293细胞的Beclin1和LC3的蛋白表达;并导致自噬体(黄色亮点)及自噬溶酶体(红色亮点)明显减少.结论 采用靶向3′-UTR的特异siRNA可成功敲低(knock-down)人Beclin1的表达,并减少细胞自噬活性.成功建立的3′-UTR特异siRNA方法,为以后干扰和突变体共表达研究提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘少军	广州医科大学附属第二医院广州心血管疾病研究所	10	11	2.0	3.0
2	黄桢钧	广州医科大学附属第二医院广州心血管疾病研究所	5	6	1.0	2.0