携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

• 作者: 孙丽丽 尹逊哲 崔传信 崔英丽 朱羿龙 李一权 李善智 李敏 李文杰 李霄 赵津 郑颖 郭焱 金宁一 陈爽
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈癌 HeLa细胞 凋亡素基因 溶瘤腺病毒 自噬 凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 1356-1361
• 页数: 6页
• 分类号: R730.54|R737.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385x.2017.12.003

摘要

目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响.方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting法检测ATV感染对HeLa细胞自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV感染对HeLa细胞自噬水平的影响.结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100MOI感染72 h后抑制率达到59.26％,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P＜0.01).ATV感染48 h,ATV组HeLa细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)％vs(14.680±1.174)％,P＜0.01].感染后的HeLa细胞,随着ATV作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组[(58.490±2.447)％vs (43.235±4.419)％,P＜0.05].与对照组相比,ATV感染HeLa后,LC3表达量6、12h逐渐增高,12h达到最大值(P＜0.01),24 h表达量最低(P＜0.01);P62蛋白在24 h出现最高表达水平(P＜0.01);而mTOR随着作用时间延长逐渐降低(48 h时,P＜0.01).荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h自噬小体数量显著增多[(28.000±2.828) vs (8.500±2.121),(37.000±4.243) vs(14.000±1.414);均P＜0.01],24 h相对减少[(12.000±2.828) vs (17.000±1.414),P＜0.01].结论:携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞.