农杆菌介导的携带egfp基因载体转化寡雄腐霉

• 作者: 巩晓芳 彭轶楠 杨晖 王沛雅 王治业 郑群
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 寡雄腐霉 生防真菌 农杆菌 遗传转化 egfp基因
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1583-1595
• 页数: 13页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170096

摘要

[目的]寡雄腐霉(Pythium oligandrum Drechsler)是一种对动、植物和环境无害,兼具杀菌和增产效果的生防真菌.通过研究建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系.[方法]选用EHA 105、AGL-1、LBA4404三种农杆菌菌株对寡雄腐霉进行遗传转化研究,通过对影响遗传转化效果的条件参数试验优化,确立适宜寡雄腐霉遗传转化的农杆菌菌株及转化条件,建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系.[结果]经研究发现,所选3种农杆菌菌株中EHA105菌株对寡雄腐霉的遗传转化效果最好,其次是AGL-1菌株,LBA4404菌株转化效果不好.EHA 105菌株经IM(含300 μmol/L AS)诱导培养至OD600=0.6时,与浓度为106-107个/mL的寡雄腐霉孢子悬浮液以1-10∶1的比例混合,在25-26℃以液体振荡的方式避光共培养72 h(pH 5.0,含300 tmol/L AS),寡雄腐霉菌体液体振荡恢复培养24 h,涂布抗性选择平板筛选寡雄腐霉转化子,即可得到寡雄腐霉基因工程菌株,其转化率可达到130个转化子/106个孢子.[结论]本研究首次构建了农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系,研究结果可为寡雄腐霉的生防机制及分子育种研究提供技术支撑.