果梅CCoAOMT蛋白Western-blot体系建立与优化

• 作者: 侍婷 吴欣欣 张勇 高志红
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 果梅 花芽 蛋白提取 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) Western-blot
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 977-982
• 页数: 6页
• 分类号: S662.4
• 字数: 5153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201702012

摘要

[目的]本文旨在建立一套适合于果梅(nunus mume) Western-blot的蛋白质提取和技术体系.[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较2种提取方法的优劣,并通过设置不同的蛋白上样量(20、30、40、50及60μg)、转膜时间(40、60及90 min)、一抗稀释比例(1∶500、1∶1 000、1∶2000及1∶5 000)以及一抗孵育时阏(室温1h、室温2h及4℃过夜)等组合,研究适合果梅花芽CCoAOMT蛋白Western-blot的最佳体系.[结果]成功建立了快速、灵敏、特异的Western-blot体系,确定了果梅花芽CCoAOMT蛋白的Western-blot试验条件.SDS上样缓冲液直接提取法提取蛋白快速、高效,最佳条件为以蛋白上样量30 μg、转膜1h、一抗稀释比例1∶1000以及一抗孵育2h.[结论]本试验建立了简单、快速和重复性好的SDS上样缓冲液直接提取法以及优化的上样量、转膜时间和抗体浓度等Western-blot体系,为梅等木本植物开展Westem-blot研究提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高志红	南京农业大学园艺学院	114	1632	21.0	37.0
2	侍婷	南京农业大学园艺学院	16	81	5.0	8.0
3	张勇	南京农业大学园艺学院	31	303	10.0	16.0
4	吴欣欣	南京农业大学园艺学院	4	20	2.0	4.0