小菜蛾C型凝集素基因PxCTL5的克隆及其在细菌刺激下的转录水平变化

• 作者: 余静 许小霞 金丰良 高延富
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小菜蛾 C型凝集素 基因克隆 微生物诱导 免疫应答
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 876-890
• 页数: 15页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2017.08.004

摘要

[目的]本研究旨在克隆小菜蛾Plutella xylostella体内一种C型凝集素基因,检测其在小菜蛾体内的表达模式,并探讨该蛋白对细菌的凝集作用.[方法]基于对小菜蛾转录组和基因组进行生物信息学分析的基础上,RT-PCR结合RACE技术克隆小菜蛾C型凝集素基因全长cDNA序列.构建原核表达质粒载体,在大肠杆菌BL21中高效表达小菜蛾C型凝集素融合蛋白,利用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗血清.利用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测小菜蛾C型凝集素基因在小菜蛾不同发育时期(卵期、1-4龄幼虫、预蛹期、蛹期和成虫期)和小菜蛾4龄第1天幼虫不同组织(血细胞、表皮、脂肪体、中肠和马氏管)中的表达模式.RT-qPCR和Western blot检测小菜蛾C型凝集素基因在大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌刺激下的表达差异.显微镜下观察重组蛋白对这两种细菌的体外凝集现象.[结果]克隆了小菜蛾型C型凝集素基因PxCTL5(GenBank登录号:KY807084),cDNA序列全长1 243 bp,开放阅读框(ORF)序列长672bp,编码223个氨基酸残基.RT-qPCR显示PxCTL5基因在小菜蛾各个龄期均有表达,在成虫期处于高水平表达;主要在表皮中表达,可被苏云金芽孢杆菌和大肠杆菌强烈诱导表达,表达高峰期分别为诱导后18h和24 h.Western blot检测表明,经苏云金芽孢杆菌和大肠杆菌诱导后,小菜蛾血淋巴中PxCTL5蛋白表达量明显提高.体外凝集实验表明,在钙离子存在下,PxCTL5蛋白对两种细菌都有一定的凝集作用,对苏云金芽孢杆菌的凝集作用较强.[结论]小菜蛾PxCTL5可经细菌诱导表达,PxCTL5对苏云金芽孢杆菌有较强凝集作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金丰良	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	6	19	3.0	4.0
2	许小霞	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	7	29	3.0	5.0
3	余静	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	2	3	1.0	1.0
4	高延富	华南农业大学农学院广东省生物农药创制与应用重点实验室	2	3	1.0	1.0