核蛋白Sam68的原核表达及鉴定

• 作者: 丁筠 张华 曹宏伟 李丽阳 李鹏飞 潘子夜 肖丽杰 邹德华 陈宁
• 来源期刊: 黑龙江八一农垦大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Sam68 原核表达 载体构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 73-76,81
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3002字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2090.2017.03.016

摘要

为了构建pGEX-4T-1-Sam68原核表达载体,表达并鉴定GST-Sam68融合蛋白,采用PCR扩增Sam68基因,插入pGEX-4T-1的EcoR I和Sal I位点,并转化Rosetta(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot验证蛋白表达,GST pull-down技术验证Sam68的结合活性.酶切和测序结果证实Sam68基因正确插入pGEX-4T-1载体中,载体能够在Rosetta(DE3)细胞中正确表达,且纯化的GST-Sam68蛋白具有与PI3K p85特异结合的活性,说明成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-Sam68.