Pim-1基因重组腺相关病毒2载体的构建及感染大鼠视网膜

• 作者: 刘芳 张守梅 王栋 许家军 黄婷婷
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: Pim-1 腺相关病毒2载体 感染 视网膜 免疫印迹法 大鼠
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 神经生物学
• 页码范围: 121-127
• 页数: 7页
• 分类号: R322.9+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.02.001

摘要

目的 构建携带大鼠原癌基因Pim-1的重组腺相关病毒2载体(rAAV2-Pim-1),检测其体内感染大鼠视网膜的细胞类型及目的基因Pim-1在视网膜中的表达.方法 pAOV-CAGMINI-EGFP-2A-MCS-3FLAG载体及Pim-1基因PCR产物用Nhel酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定后回收载体及目的基因DNA并连接转化,鉴定质粒阳性克隆及测序.rAAV2-Pim-1表达质粒pAOV-CAGMINI-EGFP-2A-Pim-1-3FLAG及包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper,通过Lipofectamine 2000共转染293细胞,纯化获得高滴度的rAAV2-Pim-1.大鼠玻璃体注射rAAV2-Pim-1,用免疫荧光组织化学检测其感染视网膜的细胞类型;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在视网膜中的表达.结果 rAAV2-Pim-1质粒构建成功并且核苷酸序列比对正确;质粒转染293细胞后出现绿色荧光;包装出的病毒浓缩滴度为5.7×1015vg/L.rAAV2-Pim-1组体内感染视网膜神经节细胞(RGCs)达71％,并感染少量无长突细胞,几乎不感染星形胶质细胞;Pim-1 mRNA和蛋白在视网膜中的表达约为rAAV2-EGFP组的6.61倍和2.29倍.结论 成功构建rAAV2-Pim-1病毒载体,并在感染后的大鼠视网膜RGCs中过表达Pim-1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许家军	第二军医大学基础部人体解剖学教研室	71	257	8.0	11.0
2	王栋	第二军医大学基础部人体解剖学教研室	33	160	7.0	10.0
3	刘芳	第二军医大学基础部人体解剖学教研室	113	548	12.0	17.0
4	张守梅	第二军医大学基础部人体解剖学教研室	3	3	1.0	1.0
5	黄婷婷	第二军医大学基础部人体解剖学教研室	6	41	3.0	6.0