应用外部引导序列切割人巨细胞病毒UL148 RNA的研究

• 作者: 丁俊彩 伍苑宾 王波 胡兢晶 苏海浩 蔡丽君 谢斌华 郭媛媛 郭梦杰
• 来源期刊: 中华实验和临床病毒学杂志
• 关键词: 人巨细胞病毒 外部引导序列 UL148 临床病毒株
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 185-188
• 页数: 4页
• 字数: 2943字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.03.001

摘要

目的 研究人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)临床病毒株UL/b'区域UL148基因功能及抗HCMV治疗新策略,应用DNA性质外部引导序列(External guide sequences,EGS)在体外抑制UL148 RNA的表达.方法 应用RNA structure生物软件模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS,并合成EGS核苷酸序列.应用PCR方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148 RNA及M1RNA,其中UL148以32p标记并进行体外转录.混合EGS、M1RNA及UL148 RNA于切割反应液中,反应1h后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果.结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58 ～72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57与UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的茎环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可切割UL148RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王波	广东省妇幼保健院儿科	47	196	9.0	11.0
2	苏海浩	广东省妇幼保健院儿科	25	75	5.0	8.0
3	蔡丽君	广东省妇幼保健院儿科	3	1	1.0	1.0
4	胡兢晶	广东省妇幼保健院儿科	15	47	3.0	6.0
5	伍苑宾	广东省妇幼保健院儿科	9	13	2.0	3.0
6	郭梦杰	广东省妇幼保健院儿科	6	1	1.0	1.0
7	丁俊彩	广东省妇幼保健院儿科	4	22	2.0	4.0
8	郭媛媛	广东省妇幼保健院儿科	1	0	0.0	0.0
9	谢斌华	广东省妇幼保健院儿科	1	0	0.0	0.0