猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备

• 作者: 凌红丽 夏叶 廖学文 易建中 李春华 缪德年 蒋贻海 郭佳宏
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2d亚型 ORF2基因 可溶性表达 病毒样颗粒
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 43-48
• 页数: 6页
• 分类号: S859.79
• 字数: 4506字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2017.06.09

摘要

为了制备猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒,根据GeneBank上公布的PCV2d亚型HB-MC1株的序列和大肠杆菌密码子使用频率表优化合成PCV2d亚型ORF2基因,克隆到原核表达载体pET30a(+),获得重组表达质粒pET30a-Cap2d,将该质粒转化入Rosetta(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE对目的基因的表达及产物的可溶性进行分析,利用Western blot和琼脂凝胶免疫扩散试验鉴定重组蛋白的免疫原性,并利用电镜技术鉴定重组Cap2d蛋白形成的病毒样颗粒.SDS-PAGE结果表明PCV2d的ORF2基因在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达;电镜下观察超声破碎后的上清中存在大量直径约17 nm的病毒样颗粒;Western blot和琼脂凝胶免疫扩散试验结果表明该可溶性蛋白可与猪PCV2阳性血清特异性结合,具有较好的免疫原性.本研究为制备PCV2d亚单位疫苗和相关检测试剂盒奠定了基础.