羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达

• 作者: 庞峰 彭冬梅 曹瑞勇 朱姝 李亚颖 李国华 杨小健 王凤阳 聂鑫
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 羊传染性脓疱病毒 CEV112基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 68-72
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.1|Q789
• 字数: 3549字
• 语种: 中文

摘要

为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867 bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌(E.coli)DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定.鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中.经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析.结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36 ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础.