一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法

• 作者: 周鹏 庹德财 沈文涛 言普 黎小瑛
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酵母同源重组 番木瓜畸形花叶病毒 侵染性克隆 不稳定性
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 1492-1500
• 页数: 9页
• 分类号: Q78
• 字数: 7392字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.08.019

摘要

侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难.通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)的侵染性克隆.经研究证实,该不稳定现象确实存在于大肠杆菌中,而非酵母和农杆菌细胞.通过改良酵母同源重组方法,成功构建了有/无内含子intron 2的PLDMV侵染性克隆p35S-FL和p35S-FL-In2,农杆菌注射接种番木瓜均发病,侵染效率达64.7%~69.7%.本研究通过酵母同源重组质粒直接转化农杆菌,建立了一种10 d内即可稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的E.coli-Free酵母同源重组新方法.该方法对其他在大肠杆菌中不稳定的植物病毒侵染性克隆的构建具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周鹏	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	129	1451	21.0	32.0
2	黎小瑛	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	36	352	8.0	18.0
3	沈文涛	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	66	524	11.0	20.0
4	言普	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	33	132	5.0	9.0
5	庹德财	中国热带农业科学院热带生物技术研究所	13	24	3.0	4.0