布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究

• 作者: 吴小卡 左佳坤 徐达 王成明 米荣升 荆雅玮 陈兆国 韩先干 黄燕
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁菌 甲硫氨酸循环 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 催化活性 信号分子AI-2
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 697-702
• 页数: 6页
• 分类号: Q343.1|S852.612
• 字数: 4530字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201608021

摘要

[目的]细菌的sahH基因编码S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SahH),该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(AMC),调控细菌的多种生理功能.[方法]通过构建重组表达质粒pET28a-Bru-sahH和pET28a-Pse-sahH,分别表达布鲁菌(Brucella abortus)S2308株和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PA01株的SahH重组蛋白Bru-SahH和Pse-SahH.将纯化后的Bru-SahH、Pse-SahH以及我们前期表达纯化的禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的Pfs和LuxS蛋白,分别在体外催化S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),通过对产物同型半胱氨酸(HCY)的浓度测定,评价不同重组蛋白的催化活性,并对催化底物时产生的自诱导分子2(AI-2)活性进行检测.[结果]Bru-SahH和Pse-SahH分别催化1 mmol·L-1 SAH生成38和47tμmol·L-1 HCY,而APEC的Pfs和LuxS蛋白能催化相同浓度的SAH产生401 μmol·L-1 HCY.运用哈维弧菌BB170检测上述底物的AI-2活性,结果表明只有同时采用AEPC的Pfs和LuxS蛋白催化SAH,才能形成有活性的AI-2分子,而Bru-SahH和Pce-SahH均不能催化SAH形成活性AI-2分子.[结论]Bru-SahH能催化SAH生成HCY,为进一步研究sahH在布鲁菌感染过程中的作用提供依据.