2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶基因的克隆表达及酶活性测定

• 作者: 唐慧娴 潘秀珍 王依 王长军 钱思彤 龚秀芳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 2型猪链球菌 N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 69-76
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 4599字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.02.001

摘要

目的:克隆表达2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶(NagA)的编码基因,并测定其酶活性.方法:根据GenBank中05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增NagA (SSU05_1259)基因,将其克隆到pET28a载体中,构建重组质粒pET28a:NagA,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE与质谱鉴定;利用Ni亲和层析柱对表达产物进行纯化,获得NagA重组蛋白后测定其酶活性.结果:在大肠杆菌中高效表达了NagA基因,重组表达的NagA相对分子质量约为43×103,其酶促反应最适温度为37℃,最佳反应时间为30 min,最适反应pH值为7.5,最佳底物浓度为13 mmol/L.2型猪链球菌NagA的体外酶活为124 U/mL,酶比活为78 U/mg.结论:在原核系统中表达了NagA基因,获得的NagA蛋白具有良好的酶学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长军	中国药科大学药学院	134	625	12.0	17.0
3	潘秀珍		80	452	10.0	17.0
4	龚秀芳	中国药科大学药学院	10	13	3.0	3.0
6	王依		5	4	1.0	1.0
7	钱思彤	中国药科大学药学院	1	1	1.0	1.0
13	唐慧娴	中国药科大学药学院	5	8	2.0	2.0