青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用

• 作者: 于淼 方健 李玲玉 陈天圣
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 青鳉 Prdm14 原核表达 多克隆抗体 干细胞
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 页码范围: 748-754
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 5454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2017.93

摘要

青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体.首先,将prdm14基因的部分编码区连接到pET32a质粒中,构建重组表达载体pET32a-prdm14?600.随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,获得分子量为60 kD的Prdm14重组蛋白.接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化,免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),6周后获得阳性抗体,最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性.结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下,可获得Prdm14重组蛋白的高效表达;制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在HepG2细胞中过表达的青鳉Prdm14:EGFP融合蛋白.综上所述,研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体,该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于淼	华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室	3	40	2.0	3.0
2	方健	华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室	2	6	1.0	2.0
3	李玲玉	华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室	2	6	1.0	2.0
4	陈天圣	华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室	3	6	1.0	2.0