草鱼TRIM32基因克隆表达及功能研究

• 作者: 刘学芹 周勇 彭俊杰 曾令兵 王业大 王方 贾路路
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: TRIM32 克隆 真核表达 NF-κB
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 页码范围: 741-747
• 页数: 7页
• 分类号: Q344+.1
• 字数: 5261字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2017.92

摘要

TRIM(Tripartite-motif protein)家族是机体先天性免疫的重要成员,参与细胞增殖分化、细胞凋亡、肿瘤抑制、抗病毒等过程.为了进一步探究TRIM蛋白在鱼类免疫中的作用,实验利用PCR方法克隆了草鱼TRIM32基因的编码区全长,共1980 bp,编码660个氨基酸.草鱼TRIM32具有TRIM家族典型的3个结构域,与斑马鱼TRIM32的核苷酸序列同源性较高,遗传进化分析也聚为一支.间接免疫荧光、Western-blotting检测结果显示草鱼TRIM32在EPC细胞中成功表达,主要以点状分布在细胞质中,细胞核中表达量较少;组织分布分析表明TRIM32在被检测的11个组织中均有表达,其中在头肾组织中的表达量明显高于其他组织;不同胚胎发育时期的表达分析进一步表明,TRIM32在受精卵时期、卵裂期和囊胚期的表达量显著高于其他时期(P<0.05),随后表达量下降,直到出膜后表达量再次显著性升高.此外,双荧光素酶检测系统显示TRIM32能够激活NF-κB信号通路,诱导下游的炎症反应.结果显示,草鱼TRIM32广泛分布于鱼体内,并参与机体的天然免疫反应,对于抵抗病原体的入侵具有重要作用.