鸭疫里默氏杆菌Mtan对底物SAH的催化活性

• 作者: 吕小龙 吴小卡 徐达 王成明 米荣升 胡剑刚 荆雅玮 陈兆国 韩先干 黄燕
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 鸭疫里默氏杆菌 S-腺苷高半胱氨酸核苷酶 S-腺苷同型半胱氨酸 密度感应系统 自诱导物质AI-2
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 兽医微生物
• 页码范围: 1165-1170
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160537

摘要

[目的]分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)不同血清型pfs基因的序列差异,并开展其编码蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan,又称Pfs)的催化活性研究.[方法]PCR扩增9株不同血清型RA的pfs基因,分析其核苷酸序列的同源性;构建该基因的重组表达载体pCold-RA-pfs,表达、纯化RA的重组蛋白Mtan(RA-Mtan);测定RA-Mtan对底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的催化活性,运用哈维弧菌报告菌株BB170检测催化底物的自诱导物2 (Autoinducer-2,AI-2)活性.[结果]对RA的pfs序列分析结果表明,不同血清型RA的核苷酸一致性在93.9％-100％之间;SDS-PAGE检测结果表明,RA-Mtan呈可溶性表达;酶活测定表明RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli,APEC)的LuxS蛋白共同作用于底物时,可产生浓度为176.7 μmol/L的同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY);AI-2活性检测结果表明,产生的AI-2具有生物学活性.[结论]RA不同血清型的pfs高度保守,RA pfs基因的编码产物RA-Mtan在体外具有催化SAH的活性,RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌的LuxS 蛋白共同作用于底物SAH时,能产生有活性的AI-2,为进一步研究pfs对RA的调控作用提供参考.