Bcl-2结合抗凋亡基因3参与子宫颈癌上皮间质转化的机制研究

• 作者: 王伟 秦晓鹏 赵兴波 魏莉
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 宫颈肿瘤 上皮-间质转化 衔接蛋白质类,信号转导 凋亡调节蛋白质类
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 551-557
• 页数: 7页
• 字数: 5858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2017.08.009

摘要

目的 探讨Bcl-2结合抗凋亡基因3(BAG3)在子宫颈癌组织和细胞中的表达以及对子宫颈癌上皮间质转化(EMT)的作用及其机制.方法 (1)收集2015年9月至2017年3月山东大学齐鲁医院和附属省立医院病理科保存的子宫颈癌标本50份,以2015年8月至2017年3月德州市立医院妇科收治的因子宫肌瘤行子宫全切除术或行子宫颈活检患者的正常子宫颈组织50份作为对照,分别采用逆转录(RT)-PCR技术和蛋白印迹(western blot)法检测BAG3 mRNA和蛋白的表达并分析其临床意义.(2)选择子宫颈癌细胞系HeLa和SiHa细胞,以正常子宫颈上皮细胞为对照,分别采用RT-PCR技术和western blot法检测细胞中BAG3 mRNA和蛋白的表达;以下实验分为两组,即转染组[转染BAG3基因的小分子干扰RNA(si-BAG3)]和对照组[转染对照小分子干扰RNA(siRNA)],采用活细胞计数(CCK-8)法检测转染后两组HeLa和SiHa细胞的增殖情况[以吸光度(A)值表示];体外划痕实验和transwell小室实验检测转染后两组HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭能力(分别以愈合率和穿膜细胞数表示);建立两组子宫颈癌HeLa和SiHa细胞的裸鼠移植瘤模型,观察BAG3对移植瘤成瘤的影响,并采用western blot法检测移植瘤组织中EMT相关生物标志物[包括锌指转录因子(Slug)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)]蛋白的表达.结果 (1) RT-PCR技术和western blot法分别检测显示,子宫颈癌组织中BAG3 mRNA和蛋白的表达水平分别为1.20±0.15、1.10±0.16,明显高于正常子宫颈组织(分别为0.23±0.04、0.29±0.03,P均＜0.01);子宫颈癌组织中BAG3 mRNA和蛋白的表达水平与临床分期、淋巴结转移状态均明显相关(P＜0.05),而与患者的年龄、病理分级、肿瘤直径均无相关性(P＞0.05).(2)RT-PCR技术和western blot法分别检测显示,与正常子宫颈上皮细胞比较,HeLa和SiHa细胞中BAG3 mRNA和蛋白表达水平均明显增高(P均＜0.01);转染组HeLa和SiHa细胞中BAG3 mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P均＜0.01).CCK-8法检测显示,转染后72 h,转染组HeLa和SiHa细胞的A值分别为0.88±0.08、0.92±0.09,明显低于对照组(分别为1.22±0.13、1.35±0.12,P均＜0.01);体外划痕实验检测显示,转染组HeLa和SiHa细胞的愈合率分别为(20.1±2.1)％、(21.1±2.1)％,均明显低于对照组[分别为(58.6±5.6)％、(61.7±5.4)％,P均＜0.01];体外transwcll小室实验检测显示,转染组HcLa和SiHa细胞的穿膜细胞数分别为(76±11)、(71±8)个,均明显少于对照组[分别为(131±12)、(129±14)个,P均＜0.01].裸鼠在接种转染组HeLa和SiHa细胞后的成瘤时间分别为(9.5±0.5)、(10.5±1.3)d,明显长于接种对照组HeLa和SiHa细胞后的成瘤时间[分别为(4.5±0.5)、(5.2±1.1)d,P均＜0.05];与接种对照组HeLa和SiHa细胞的裸鼠相比,接种转染组HeLa和SiHa细胞的裸鼠移植瘤组织中Slug、MMP-2和N-cadherin蛋白的表达水平均明显下降(P均＜0.01),E-cadherin蛋白的表达水平均明显升高(P均＜0.01).结论 BAG3 mRNA和蛋白在子宫颈癌组织和细胞中均高表达;BAG3通过影响子宫颈癌EMT的发生进而参与子宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭过程,因而BAG3有望成为子宫颈癌治疗的有效靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵兴波	山东大学附属省立医院妇科	37	168	7.0	10.0
2	魏莉	山东省德州市立医院妇科	2	6	1.0	2.0
3	秦晓鹏	山东省德州市立医院妇科	3	8	1.0	2.0
4	王伟	齐鲁医院妇科	1	6	1.0	1.0