山羊PMEL基因启动子活性及转录调控元件分析

• 作者: 彭永东 李丽莎 李祥龙 郑晓宁
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PMEL基因 启动子 瞬时表达 点突变 转录调控元件
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 826-835
• 页数: 10页
• 分类号: S827|S813.3
• 字数: 5881字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.05.006

摘要

旨在筛选调控山羊毛色基因PMEL的启动子活性区域及转录因子,为探究该基因的表达调控机制提供理论依据,并为彩色山羊的育种和改良提供思路.以山羊基因组DNA为模板,PCR扩增PMEL基因不同长度的启动子缺失片段,定向克隆至pGL3-basic载体,将重组质粒转染到293T和A375细胞,通过双荧光素酶检测系统测定相对荧光素酶活性值;利用生物信息学方法对PMEL基因核心启动子区的转录因子结合位点进行预测,随后利用重叠延伸PCR分别对pGL3-327质粒上预测的转录因子结合位点进行点突变并构建突变载体,利用双荧光素酶检测系统进行活性验证.结果显示,本研究成功构建了7个不同长度的启动子片段,其中6个片段具有明显的启动子活性.经过双荧光素酶活性检测发现山羊PMEL基因-251/+76区域为核心启动子区域.通过不同长度的启动子片段的活性比较发现,-251/-62区域的缺失造成启动子活性从最高到消失,表明该区域对山羊PMEL基因转录调控有重要影响,生物信息学分析发现该区域存在5个转录因子结合位点,利用点突变构建了5个突变载体,经过双荧光素酶检测发现5个突变载体的活性均显著下降.提示这5个转录因子是山羊PMEL基因转录的正调控元件.本研究确定了山羊PMEL基因启动子核心区域为-251/+76,NF-1(-206/-197)、Sp1(-186/-174)、Sp1(-151/-139)、CREB(-91/-82)和Sp1(-82/-71)结合位点为山羊PMEL基因转录的正调控元件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李祥龙		85	260	9.0	11.0
2	李丽莎		14	71	5.0	7.0
4	彭永东		23	38	3.0	5.0
5	郑晓宁		4	16	2.0	4.0