甲基戊糖梭菌膜整合焦磷酸酶提高转基因烟草的抗旱性

• 作者: 刘娴 刘延娟 杨玉梅 袁航 邹竹荣 高艳秀 龚明
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 甲基戊糖梭菌 膜整合焦磷酸酶 基因克隆 转基因烟草 抗旱性
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 81-88
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1208

摘要

由焦磷酸(PPi)驱动的膜整合焦磷酸酶(PPase)在生物适应逆境方面可能起着重要作用,包括H+-PPase、Na+-PPase和Na+,H+-PPase三个亚家族.相比于H+-PPase,其它两个亚家族PPase近年来才在原核生物(特别是动物肠道菌)中被发现,有关它们的应用研究更是匮乏.通过两轮巢式PCR从人肠道宏基因组中扩增得到甲基戊糖梭菌膜整合焦磷酸酶(CmPP)全长基因.序列分析表明该基因含有一个完整的ORF(长2100 bp,编码一个699 aa的蛋白质,G+C含量为59.9%,碱基分布均衡).膜拓扑学结构预测CmPP是一个由16个跨膜 α 螺旋组成的膜蛋白,与目前已鉴定过的膜PPase跨膜结构相符.序列比对分析推测CmPP属于K+依赖型Na+,H+-PPase亚家族成员.另外,通过农杆菌转化获得了CmPP转基因烟草.对其子一代植株的抗旱分析发现,在干旱胁迫条件下CmPP转基因株系的干物质含量、总叶绿素含量和根系活力均下降,而其叶片MDA含量和电解质渗透率均升高,但相同胁迫下的变化程度都显著低于野生型烟草.这些结果表明CmPP基因的导入能够有效提高烟草的抗旱能力.