肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析

• 作者: 严杰 孙爱华 张新蔚 楼永良 黄燕颖
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 肺炎链球菌 丝氨酸/苏氨酸激酶 β-内酰胺类抗生素 结合 基因敲除/耐药
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 424-430
• 页数: 7页
• 字数: 5209字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2017.06.004

摘要

目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除(ΔstkP)突变株.采用E-test检测青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度(MIC).采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因(stkP)胞外区(EC-StkP)、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段(EC-stkP),T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白(EC-rStkP)表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法(VT-ITC)和表面等离子共振法(Biacore)检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果 肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感(MIC=0.06和0.12 μg/ml),但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药(MIC=16和32 μg/ml).肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关(PASTA)功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP.PCN和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论 肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0