酿酒葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立

• 作者: 左存武 毛娟 王凯 胡紫璟 苏静 陈佰鸿
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 酿酒葡萄 病毒 检测 多重RT-PCR
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 632-638
• 页数: 7页
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20160283

摘要

[目的]建立快速、灵敏的葡萄病毒多重RT-PCR检测体系.[方法]通过设计6对不同引物,在退火温度分别为48.0、49.0、50.0、51.0、52.0、53.0、54.0、55.0、56.0、57,0、58.0、59.0和60.0℃,采用单一RT-PCR技术检测酿酒葡萄6种常见的葡萄病毒,即葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFKV)、葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)、葡萄卷叶病毒1(Grapevine leafroll associated virus-1,GLRaV-1)、葡萄卷叶病毒2(Grapevine leafroll associated virus-1,GLRaV-2)和葡萄卷叶病毒4(Grapevine leafroll associated virus-4,GLRaV-4).在此基础上,对退火温度相似、扩增片段长度不同的引物进行组合,建立能同时检测2种或2种以上病毒的多重RT-PCR检测体系.[结果]单一RT-PCR结果显示,退火温度为49℃、55℃和60℃时,可分别检测GVA和GLRaV、GLRaV和GFKV以及GFLV和GLRaV.多重RT-PCR结果显示,退火温度分别为49℃和55℃时,引物GVA和GLRaV-2以及引物GLRaV-1和GFKV组合所建立的2个多重RT-PCR检测体系可同时检测葡萄叶片中GVA和GLRaV以及GLRaV和GFKV.所检测的河西地区16份样品普遍携带葡萄病毒,部分葡萄样品同时携带两种病毒.其中,5份样品为GVA阳性,8份为GLRaV-1阳性,3份为GLRaV-2阳性,5份为GFKV阳性,所有样品均未检测到GFLV和GLRaV-4.退火温度分别为49℃和55℃时所建立的GVA和GLRaV以及GLRaV和GFKV两个多重PCR扩增体系检测结果与各样品单一PCR检测结果均一致.[结论]建立2套多重PCR检测体系,可同时有效地检测GVA和GLRaV-2或GLRaV-1和GFKV,可用于田间葡萄样品的快速检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈佰鸿		128	886	13.0	25.0
2	毛娟		91	429	10.0	18.0
3	左存武		19	31	3.0	5.0
4	王凯		6	35	2.0	5.0
5	苏静		4	14	2.0	3.0
6	胡紫璟		10	32	3.0	5.0