独行菜C4H基因克隆与表达分析

• 作者: 冯卫生 杨泽岸 赵乐 郑晓珂 马利刚
• 来源期刊: 药学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 独行菜 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 生药学
• 页码范围: 821-831
• 页数: 11页
• 分类号: R931
• 语种: 中文
• DOI: 10.16438/j.0513-4870.2017-0115

摘要

以独行菜(Lepidium apetalum)为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,克隆了独行菜肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因的cDNA序列,命名为LaC4H,GenBank登录号为KX064050,并进行生物信息学分析,原核表达、纯化,组织特异性分析和诱导表达分析.结果表明:①LaC4H基因开放阅读框(ORF)长1518 bp,编码505个氨基酸,其蛋白质分子质量为57.73kD.②生物信息学分析显示LaC4H蛋白包含细胞色素P450的保守基序和5个特征性底物结合位点,是细胞色素P450超家族成员,系统进化分析显示LaC4H蛋白与拟南芥等十字花科植物C4H蛋白同源性较高.③通过构建原核表达载体pET-32a-LaC4H在大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中成功表达LaC4H重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的LaC4H重组蛋白.④荧光定量PCR结果表明LaC4H基因在茎中表达量最高,叶和花中次之,根中表达量最低.经茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)诱导后,叶中LaC4H表达量明显上升,诱导后48 h达到最高值,叶中LaC4H的表达量与黄酮含量之间呈正相关.这为进一步研究LaC4H基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯卫生		30	0	0.0	0.0
2	郑晓珂		33	25	3.0	5.0
3	赵乐		8	0	0.0	0.0
4	马利刚		8	0	0.0	0.0
5	杨泽岸		1	0	0.0	0.0