不结球白菜开花基因BcFT的亚细胞定位及其互作蛋白的筛选

• 作者: 侯喜林 刘同坤 吴小婷 张蓓 邵帅旭 黄菲艺
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不结球白菜 BcFT 亚细胞定位 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 592-600
• 页数: 9页
• 分类号: S634.3
• 字数: 5898字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201612034

摘要

[目的]开花基因FT是开花通路下游关键基因.本文旨在研究不结球白菜BcFT的亚细胞定位及互作蛋白的筛选,深入了解不结球白菜BcFT的功能及其调控机制.[方法]构建亚细胞定位载体pEZS-NL-BcFT,利用亚细胞定位技术研究BcFT的空间表达.通过酵母双杂交技术筛选与BcFT互作的蛋白,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-BcFT,转化酵母Y2HGold菌株,验证自激活性和自毒性.对不结球白菜酵母双杂交cDNA文库进行筛选,得到与BcFT互作的片段,并根据基因片段进行比对,以不结球白菜cDNA为模板进行基因全长克隆,构建pGADT7载体,进行共转化验证,最后对筛选得到的2个蛋白进行生物信息学分析.[结果] BcFT蛋白在整个细胞中均有分布.诱饵载体pGBKTT-BcFT表达产物对酵母细胞无自激活性和自毒性,通过酵母双杂交及共转验证得到2个与BcFT互作的蛋白:BcPPD5和BcVHA-E1.生物信息学分析预测这2个蛋白均为亲水性蛋白,不含信号肽,BcPPD5蛋白的氨基酸序列存在1个跨膜区,二级结构中不规则卷曲所占比例最大,第163和296氨基酸残基之间存在1个PsbP结构域;BcVHA-E1蛋白无跨膜区,二级结构中α螺旋所占比例最大,无特定结构域.[结论]确定了BcFT蛋白在整个细胞中均有表达.利用酵母双杂交技术筛选得到2个与BcFr互作蛋白,进一步分析发现其可能通过光周期路径影响开花.