氧化应激下黑素细胞自噬相关基因差异表达分析

• 作者: 丁高中 凌雨婷 李雪 熊喜喜 赵文娥 鲁严 龚晴丽
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 黑素细胞 自噬 过氧化氢 氧化性应激 寡核苷酸序列分析 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 547-552
• 页数: 6页
• 字数: 4929字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.08.001

摘要

目的 探讨过氧化氢(H2O2)对黑素细胞自噬的影响及可能的调节机制.方法 取对数生长期健康人黑素细胞,分为空白对照组(不予任何处理)、阳性对照组(100 nmol/L西罗莫司处理)和实验组(体积分数为10-7～10-3的H2O2处理),处理4h后,使用CCK8法、流式细胞仪分别检测各组黑素细胞活性及凋亡率.吖啶橙染色检测自噬小泡,透射电镜下观察自噬小体,Western印迹检测自噬特异性蛋白Beclin 1、微管相关蛋白轻链3B(LC3B).最后采用包含84个自噬相关基因的RT2 Profiler PCR Array筛选自噬相关的差异表达基因.结果 黑素细胞分别经10-3、5×104、10-4、5×10-5、10-5、5×10-6、10-6H2O2处理后,细胞增殖活性及凋亡率与空白对照组相比差异均有统计学意义(F值分别为286.95、301.23,均P＜0.05),且随H2O2体积分数升高,增殖活性降低,凋亡率升高.除5×l0-6 H2O2组分别与10 5、10-6 H2O2组间相比细胞凋亡率差异无统计学意义外,上述各H2O2组间两两比较,黑素细胞增殖活性及凋亡率差异均有统计学意义(P＜0.05).吖啶橙染色及电镜观察发现,10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司处理的黑素细胞中有自噬小体形成.Western印迹显示,10-5H2O2、10-6H2O2和西罗莫司组黑素细胞Beclin 1表达量和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比率均较空白对照组显著升高(P＜0.05).RT2 Profiler PCR Array结果显示,与空白对照组相比,10-5 H2O2组、10-6H2O2组和西罗莫司组中ATG12、ATG3、ULK1、PIK3CG、PTEN、PIK3C3表达均显著上调,EIF2AK3表达显著下调;10-5 H2O2组和西罗莫司组mTOR表达显著下调,ULK2表达显著上调;10-6H2O2组mTOR表达未发生明显改变,AMPK、JNK1表达显著上调.结论 体积分数为10-5和10-6的H2O2均能有效诱导黑素细胞自噬,可能与影响相关信号分子表达相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲁严	南京医科大学第一附属医院皮肤科	89	552	12.0	20.0
2	李雪	南京医科大学第一附属医院皮肤科	15	33	3.0	5.0
3	赵文娥	南京医科大学分析测试中心	9	57	3.0	7.0
4	丁高中	南京医科大学第一附属医院皮肤科	8	12	1.0	3.0
5	龚晴丽	南京医科大学第一附属医院皮肤科	2	1	1.0	1.0
6	熊喜喜	南京医科大学第一附属医院皮肤科	3	1	1.0	1.0
7	凌雨婷	南京医科大学第一附属医院皮肤科	2	0	0.0	0.0